Olew pur Saposhnikovia divaricata ar gyfer canhwyllau a sebon yn gwneud tryledwr cyfanwerthol olew hanfodol newydd ar gyfer tryledwyr llosgwr cyrs
disgrifiad byr:
2.1. Paratoi SDE
Prynwyd rhisomau DC fel perlysiau sych gan Hanherb Co. (Guri, Korea). Cadarnhawyd y deunyddiau planhigion yn dacsonomaidd gan Dr. Go-Ya Choi o Sefydliad Meddygaeth Dwyreiniol Corea (KIOM). Adneuwyd sbesimen taleb (rhif 2014 SDE-6) yn Herbariwm Adnoddau Llysieuol Safonol Corea. Echdynnwyd rhisomau sych o SD (320 g) ddwywaith gyda 70% ethanol (gyda adlif 2 h) ac yna cafodd y darn ei grynhoi dan bwysau llai. Cafodd y decoction ei hidlo, ei lyoffileiddio, a'i storio ar 4 ° C. Roedd cynnyrch echdyniad sych o ddeunyddiau cychwyn crai yn 48.13% (w/w).
2.2. Dadansoddiad Cromatograffaeth Hylif Perfformiad Uchel Meintiol (HPLC).
Perfformiwyd dadansoddiad cromatograffig gyda system HPLC (Waters Co., Milford, MA, UDA) a synhwyrydd araeau ffotodiod. Ar gyfer dadansoddiad HPLC o SDE, mae'r prim-O- prynwyd safon glucosylcimifugin gan Sefydliad Hyrwyddo Korea ar gyfer Diwydiant Meddygaeth Draddodiadol (Gyeongsan, Korea), asec-O-glucosylhamaudol a 4′-O-β-D-glwcosyl-5-O-methylvisamminol eu hynysu yn ein labordy a'u nodi gan ddadansoddiadau sbectrol, yn bennaf gan NMR ac MS.
Diddymwyd samplau SDE (0.1 mg) mewn 70% ethanol (10 mL). Perfformiwyd gwahaniad cromatograffig gyda cholofn XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, UDA). Roedd y cyfnod symudol yn cynnwys acetonitrile (A) a 0.1% asid asetig mewn dŵr (B) ar gyfradd llif o 1.0 mL/munud. Defnyddiwyd rhaglen graddiant aml-gam fel a ganlyn: 5% A (0 mun), 5–20% A (0–10 mun), 20% A (10–23 mun), a 20–65% A (23–40 munud). ). Cafodd y donfedd canfod ei sganio ar 210-400 nm a'i chofnodi ar 254 nm. Cyfaint y pigiad oedd 10.0μL. Paratowyd datrysiadau safonol ar gyfer pennu tri chromon ar grynodiad terfynol o 7.781 mg / mL (prim-O- glwcosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glwcosyl-5-O-methylvisamminol), a 31.125 mg / mL (sec-O-glucosylhamaudol) mewn methanol a'i gadw ar 4 ° C.
2.3. Gwerthusiad o Weithgaredd GwrthlidiolYn Vitro
2.3.1. Diwylliant Cell a Thriniaeth Sampl
Cafwyd celloedd RAW 264.7 o'r Casgliad Diwylliant Math Americanaidd (ATCC, Manassas, VA, UDA) a'u tyfu mewn cyfrwng DMEM yn cynnwys 1% o wrthfiotigau a 5.5% FBS. Deorwyd celloedd mewn awyrgylch llaith o 5% CO2 ar 37°C. Er mwyn ysgogi'r celloedd, disodlwyd y cyfrwng â chyfrwng DMEM ffres, a lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, UDA) yn 1μychwanegwyd g/mL ym mhresenoldeb neu absenoldeb SDE (200 neu 400μg/mL) am 24 awr ychwanegol.
Cafodd celloedd eu trin â SDE a'u hysgogi â LPS am 24 h. DIM dadansoddwyd cynhyrchiad trwy fesur nitraid gan ddefnyddio'r adweithydd Griess yn ôl astudiaeth flaenorol [12]. Cyfrinachiad y cytocinau llidiol PGE2, TNF-α, a phenderfynwyd IL-6 gan ddefnyddio pecyn ELISA (systemau ymchwil a datblygu) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Penderfynwyd ar effeithiau SDE ar NO a chynhyrchu cytocin ar 540 nm neu 450 nm gan ddefnyddio Wallac EnVision™darllenydd microplate (PerkinElmer).
2.4. Gwerthusiad o Weithgaredd Gwrth-osteoarthritisYn Vivo
2.4.1. Anifeiliaid
Prynwyd llygod mawr Sprague-Dawley gwrywaidd (7 wythnos oed) gan Samtako Inc. (Osan, Korea) a'u cadw dan amodau rheoledig gyda chylch golau/tywyll 12-awr yn°C a% lleithder. Rhoddwyd diet labordy a dŵr i lygod mawrad libitum. Perfformiwyd yr holl weithdrefnau arbrofol yn unol â chanllawiau'r Sefydliad Cenedlaethol dros Iechyd (NIH) ac fe'u cymeradwywyd gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid prifysgol Daejeon (Daejeon, gweriniaeth Corea).
2.4.2. Sefydlu Mynediad Agored gyda MIA mewn Llygod Mawr
Rhoddwyd yr anifeiliaid ar hap a'u neilltuo i grwpiau triniaeth cyn cychwyn yr astudiaeth (fesul grŵp). Hydoddiant MIA (3 mg/50μL o 0.9% halwynog) wedi'i chwistrellu'n uniongyrchol i ofod rhyng-articular y pen-glin dde o dan anesthesia a achosir gyda chymysgedd o ketamine a xylazine. Rhannwyd llygod mawr ar hap yn bedwar grŵp: (1) y grŵp halwynog heb unrhyw chwistrelliad MIA, (2) y grŵp MIA gyda chwistrelliad MIA, (3) y grŵp a driniwyd gan SDE (200 mg / kg) gyda chwistrelliad MIA, a (4) ) y grŵp a gafodd ei drin ag indomethacin (IM-) (2 mg/kg) â chwistrelliad MIA. Gweinyddwyd llygod mawr ar lafar gyda SDE ac IM 1 wythnos cyn pigiad MIA am 4 wythnos. Roedd y dos o SDE ac IM a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon yn seiliedig ar y rhai a gyflogwyd mewn astudiaethau blaenorol [10,13,14].
2.4.3. Mesuriadau Dosbarthiad Pwysau'r Hindpaw
Ar ôl sefydlu OA, amharwyd ar y cydbwysedd gwreiddiol yng ngallu pwysau'r bawennau ôl. Defnyddiwyd profwr analluogrwydd (offeryniaeth Linton, Norfolk, DU) i werthuso newidiadau yn y goddefgarwch pwysau. Gosodwyd llygod mawr yn ofalus yn y siambr fesur. Dros gyfnod o 3 s roedd cyfartaledd y grym pwysau a roddwyd gan yr aelod ôl. Cyfrifwyd y gymhareb dosraniad pwysau gan yr hafaliad canlynol: [pwysau ar y goes ôl dde/(pwysau ar y goes ôl dde + pwysau ar y goes ôl chwith)] × 100 [15].
2.4.4. Mesur Lefelau Sytocin Serwm
Cafodd y samplau gwaed eu centrifugio ar 1,500 g am 10 munud ar 4°C; yna casglwyd y serwm a'i storio ar -70 ° C nes ei ddefnyddio. Mae lefelau IL-1β, IL-6, TNF-α, a mesurwyd PGE2 yn y serwm gan ddefnyddio citiau ELISA o R&D Systems (Minneapolis, MN, UDA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.
2.4.5. Dadansoddiad RT-PCR Meintiol Amser Real
Tynnwyd cyfanswm RNA o feinwe cymalau'r pen-glin gan ddefnyddio'r adweithydd TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, UDA), wedi'i drawsgrifio'n ôl i cDNA a PCR-chwyddedig gan ddefnyddio pecyn PCR TM One Step RT PCR gyda gwyrdd SYBR (Biosystemau Cymhwysol). , Grand Island, NY, UDA). Perfformiwyd PCR meintiol amser real gan ddefnyddio system PCR Amser Real Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, Grand Island, NY, UDA). Mae'r dilyniannau preimio a'r dilyniant stiliwr i'w gweld yn Nhabl1. Ychwanegwyd at aliwio cDNAs sampl a swm cyfartal o GAPDH cDNA gyda'r cymysgedd meistr TaqMan® Universal PCR sy'n cynnwys DNA polymeras yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Amodau PCR oedd 2 funud ar 50 ° C, 10 munud ar 94 ° C, 15 s ar 95 ° C, ac 1 munud ar 60 ° C am 40 cylch. Penderfynwyd ar grynodiad y genyn targed gan ddefnyddio'r dull cymharol Ct (rhif y cylch trothwy ar groesbwynt rhwng llain ymhelaethu a throthwy), yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.
Osteoarthritis (OA) yw'r anhwylder cyhyrysgerbydol mwyaf cyffredin a'r clefyd dirywiol ar y cyd mwyaf cyffredin ymhlith yr henoed [1]. Mae OA yn gyflwr a achosir yn rhannol gan anaf, colli strwythur a swyddogaeth cartilag, a dadreoleiddio llwybrau prolidiol a gwrthlidiol [2,3]. Mae'n effeithio'n bennaf ar y cartilag articular ac asgwrn isgondral cymalau synofaidd ac yn arwain at fethiant y cymalau, gan arwain at boen wrth fagu pwysau gan gynnwys cerdded a sefyll.4].
Nid oes iachâd ar gyfer OA, gan ei bod yn anodd iawn adfer y cartilag unwaith y caiff ei ddinistrio [5]. Nodau'r driniaeth yw lleddfu poen, cynnal neu wella symudedd ar y cyd, cynyddu cryfder y cymalau, a lleihau effeithiau anablu'r afiechyd. Nod triniaethau ffarmacolegol OA yw lleihau poen er mwyn cynyddu swyddogaeth y claf ar y cyd ac ansawdd bywyd. Er mai dinistrio cartilag yw'r prif ddigwyddiad mewn OA, diraddio colagen yw'r digwyddiad sylfaenol sy'n pennu dilyniant di-droi'n-ôl OA mewn cysylltiad â llid [6,7]. Disgwylir i driniaethau â gweithgaredd gwrthlidiol a chondroprotective leddfu poen a chynnal cywirdeb matrics mewn cleifion OA.
Felly, mae'n debygol y bydd lleihau llid yn fuddiol wrth reoli OA. Mae astudiaethau diweddar yn awgrymu rolau amddiffynnol ar gyfer adnoddau llysieuol ar ddatblygiad OA, o ran lliniaru llid chondrocyte a dinistrio cartilag ymhellach, trwy eu gallu i ryngweithio â meinweoedd sy'n gysylltiedig â'r cyd, gan arwain at liniaru poen yn y cymalau [8].
Mae gwraiddSaposhnikovia divaricataMae Schischkin (Umbelliferae) wedi'i ddefnyddio'n helaeth mewn meddygaeth draddodiadol ar gyfer trin cur pen, poen, llid ac arthritis yn Korea a Tsieina [9,10]. Effeithiau ffarmacolegol amrywiolSaposhnikovia divaricata(SD) hefyd yn cynnwys priodweddau gwrthlidiol, analgesig, antipyretig ac antiarthritig [9,11]. Dangosodd astudiaeth ddiweddar fod dyfyniad cromone SD yn meddu ar effeithiau arthritis gwrth-rheumatoid posibl mewn model llygoden o arthritis a achosir gan golagen [10]; fodd bynnag, ychydig o astudiaethau a gynhaliwyd i gefnogi gweithgaredd gwrthlidiol a gwrtharthritisSaposhnikovia divaricataechdynnu (SDE).
Felly, ymchwiliodd yr astudiaeth bresennol i weithgareddau gwrthlidiol ac antiosteoarthritis dyfyniad ethanol 70% o SD. Yn gyntaf, gwerthuswyd effaith gwrthlidiol SDEin vitromewn celloedd RAW 264.7 a achosir gan LPS. Nesaf, mesurwyd effaith gwrthosteoarthritis SDE trwy asesu dosbarthiad pwysau, diraddio cartilag articular, ac ymatebion llidiol mewn model llygod mawr o monosodiwm iodoacetate- (MIA-) OA a achosir.