Olew Saposhnikovia divaricata pur ar gyfer gwneud canhwyllau a sebon olew hanfodol tryledwr cyfanwerthu newydd ar gyfer tryledwyr llosgwr cyrs
disgrifiad byr:
2.1. Paratoi SDE
Prynwyd rhisomau SD fel perlysiau sych gan Hanherb Co. (Guri, Corea). Cadarnhawyd y deunyddiau planhigion yn dacsonomegol gan Dr. Go-Ya Choi o Sefydliad Meddygaeth Ddwyreiniol Corea (KIOM). Adneuwyd sbesimen taleb (rhif 2014 SDE-6) yn Herbariwm Adnoddau Llysieuol Safonol Corea. Echdynnwyd rhisomau SD sych (320 g) ddwywaith gydag ethanol 70% (gyda adlif 2 awr) ac yna crynhowyd y dyfyniad o dan bwysau is. Hidlwyd y decoction, ei lyoffilio, a'i storio ar 4°C. Cynnyrch y dyfyniad sych o ddeunyddiau cychwyn crai oedd 48.13% (p/p).
2.2. Dadansoddiad Cromatograffeg Hylif Perfformiad Uchel Meintiol (HPLC)
Perfformiwyd dadansoddiad cromatograffig gyda system HPLC (Waters Co., Milford, MA, UDA) a synhwyrydd arae ffotodiod. Ar gyfer dadansoddiad HPLC o SDE, y prif-O-prynwyd safon glwcosylcimifugin gan Sefydliad Hyrwyddo Corea ar gyfer y Diwydiant Meddygaeth Traddodiadol (Gyeongsan, Corea), aeiliad-O-glwcosylhamaudol a 4′-O-β-D-glwcosyl-5-OYnyswyd -methylvisaminol yn ein labordy a'u hadnabod trwy ddadansoddiadau sbectrol, yn bennaf gan NMR ac MS.
Diddymwyd samplau SDE (0.1 mg) mewn ethanol 70% (10 mL). Perfformiwyd gwahanu cromatograffig gyda cholofn XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, UDA). Roedd y cyfnod symudol yn cynnwys asetonitril (A) a 0.1% asid asetig mewn dŵr (B) ar gyfradd llif o 1.0 mL/mun. Defnyddiwyd rhaglen graddiant aml-gam fel a ganlyn: 5% A (0 mun), 5–20% A (0–10 mun), 20% A (10–23 mun), a 20–65% A (23–40 mun). Sganiwyd y donfedd canfod ar 210–400 nm a'i chofnodi ar 254 nm. Roedd y gyfaint chwistrellu yn 10.0μL. Paratowyd toddiannau safonol ar gyfer pennu tri chromon ar grynodiad terfynol o 7.781 mg/mL (prim-O-glwcosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glwcosyl-5-O-methylvisaminol), a 31.125 mg/mL (eiliad-O-glwcosylhamaudol) mewn methanol a'i gadw ar 4°C.
2.3. Gwerthuso Gweithgaredd GwrthlidiolYn Vitro
2.3.1. Diwylliant Celloedd a Thriniaeth Sampl
Cafwyd celloedd RAW 264.7 o'r American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, UDA) a'u tyfu mewn cyfrwng DMEM yn cynnwys 1% o wrthfiotigau a 5.5% FBS. Cafodd celloedd eu magu mewn awyrgylch llaith o 5% CO2 ar 37°C. I ysgogi'r celloedd, cafodd y cyfrwng ei ddisodli â chyfrwng DMEM ffres, a lipopolysacarid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, UDA) ar 1μychwanegwyd g/mL ym mhresenoldeb neu absenoldeb SDE (200 neu 400μg/mL) am 24 awr ychwanegol.
Cafodd celloedd eu trin ag SDE a'u symbylu ag LPS am 24 awr. Dadansoddwyd cynhyrchiad NO trwy fesur nitraid gan ddefnyddio'r adweithydd Griess yn ôl astudiaeth flaenorol [12]. Cyfrinachiad y cytocinau llidiol PGE2, TNF-α, a phenderfynwyd ar IL-6 gan ddefnyddio pecyn ELISA (systemau Ymchwil a Datblygu) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Penderfynwyd ar effeithiau SDE ar gynhyrchu NO a cytocin ar 540 nm neu 450 nm gan ddefnyddio Wallac EnVision™darllenydd microplatiau (PerkinElmer).
2.4. Gwerthuso Gweithgaredd Gwrth-osteoarthritisYn Vivo
2.4.1. Anifeiliaid
Prynwyd llygod mawr gwrywaidd Sprague-Dawley (7 wythnos oed) gan Samtako Inc. (Osan, Corea) a'u lletya o dan amodau rheoledig gyda chylchred golau/tywyllwch 12 awr yn°C a% lleithder. Darparwyd diet labordy a dŵr i'r llygod mawr.ad libitumPerfformiwyd yr holl weithdrefnau arbrofol yn unol â chanllawiau'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol (NIH) a'u cymeradwyo gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid prifysgol Daejeon (Daejeon, Gweriniaeth Corea).
2.4.2. Ysgogi OA gydag MIA mewn Llygod Mawr
Cafodd yr anifeiliaid eu rhoi ar hap a'u neilltuo i grwpiau triniaeth cyn cychwyn yr astudiaeth (fesul grŵp). Toddiant MIA (3 mg/50μL o halwynog 0.9%) wedi'i chwistrellu'n uniongyrchol i'r gofod mewngymalol yn y pen-glin dde o dan anesthesia a ysgogwyd gyda chymysgedd o cetamin a xylasin. Rhannwyd y llygod mawr ar hap yn bedwar grŵp: (1) y grŵp halwynog heb bigiad MIA, (2) y grŵp MIA gyda phigiad MIA, (3) y grŵp a gafodd driniaeth SDE (200 mg/kg) gyda phigiad MIA, a (4) y grŵp a gafodd driniaeth indomethacin (IM-) (2 mg/kg) gyda phigiad MIA. Rhoddwyd SDE ac IM i'r llygod mawr ar lafar 1 wythnos cyn pigiad MIA am 4 wythnos. Roedd y dos o SDE ac IM a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon yn seiliedig ar y rhai a ddefnyddiwyd mewn astudiaethau blaenorol [10,13,14].
2.4.3. Mesuriadau o Ddosbarthiad Pwysau'r Pawen Gefn
Ar ôl ysgogi OA, tarfwyd ar y cydbwysedd gwreiddiol yng ngallu cario pwysau'r pawennau cefn. Defnyddiwyd profwr analluogrwydd (Linton Instrumentation, Norfolk, DU) i werthuso newidiadau yn y goddefgarwch cario pwysau. Gosodwyd llygod mawr yn ofalus yn y siambr fesur. Cyfartaleddwyd y grym cario pwysau a roddwyd gan yr aelod cefn dros gyfnod o 3 eiliad. Cyfrifwyd y gymhareb dosbarthu pwysau gan ddefnyddio'r hafaliad canlynol: [pwysau ar yr aelod cefn dde/(pwysau ar yr aelod cefn dde + pwysau ar yr aelod cefn chwith)] × 100 [15].
2.4.4. Mesuriadau Lefelau Cytocin Serwm
Cafodd y samplau gwaed eu centrifugio ar 1,500 g am 10 munud ar 4°C; yna casglwyd y serwm a'i storio ar −70°C tan ei ddefnyddio. Lefelau IL-1β, IL-6, TNF-α, a mesurwyd PGE2 yn y serwm gan ddefnyddio citiau ELISA gan R&D Systems (Minneapolis, MN, UDA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.
2.4.5. Dadansoddiad RT-PCR Meintiol Amser Real
Cafodd cyfanswm yr RNA ei echdynnu o feinwe cymal y pen-glin gan ddefnyddio'r adweithydd TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, UDA), ei drawsgrifio'n wrthdro i cDNA a'i fwyhau â PCR gan ddefnyddio pecyn PCR TM One Step RT gyda gwyrdd SYBR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, UDA). Perfformiwyd PCR meintiol amser real gan ddefnyddio system PCR Amser Real Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, Grand Island, NY, UDA). Dangosir y dilyniannau primer a'r dilyniant chwiliedydd yn Nhabl.1Cafodd darnau bach o cDNA sampl a swm cyfartal o cDNA GAPDH eu mwyhau gyda chymysgedd meistr TaqMan® Universal PCR sy'n cynnwys polymerase DNA yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr (Applied Biosystems, Foster, CA, UDA). Yr amodau PCR oedd 2 funud ar 50°C, 10 munud ar 94°C, 15 eiliad ar 95°C, ac 1 funud ar 60°C am 40 cylch. Penderfynwyd crynodiad y genyn targed gan ddefnyddio'r dull Ct cymharol (rhif cylch trothwy wrth groesbwynt rhwng plot mwyhau a throthwy), yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.
Osteoarthritis (OA) yw'r anhwylder cyhyrysgerbydol mwyaf cyffredin a'r clefyd cymalau dirywiol mwyaf cyffredin yn yr henoed [1Mae OA yn gyflwr a achosir yn rhannol gan anaf, colli strwythur a swyddogaeth cartilag, a chamreoleiddio llwybrau pro-llidiol a gwrthlidiol [2,3Mae'n effeithio'n bennaf ar y cartilag articular a'r asgwrn isgondral mewn cymalau synovial ac yn arwain at fethiant cymalau, gan arwain at boen wrth gario pwysau gan gynnwys cerdded a sefyll [4].
Nid oes iachâd ar gyfer OA, gan ei bod hi'n anodd iawn adfer y cartilag ar ôl iddo gael ei ddinistrio [5]. Nodau'r driniaeth yw lleddfu poen, cynnal neu wella symudedd cymalau, cynyddu cryfder y cymalau, a lleihau effeithiau anablu'r clefyd. Nod triniaethau ffarmacolegol ar gyfer OA yw lleihau poen er mwyn cynyddu swyddogaeth cymalau ac ansawdd bywyd y claf. Er mai dinistrio cartilag yw'r prif ddigwyddiad mewn OA, diraddio colagen yw'r digwyddiad sylfaenol sy'n pennu dilyniant anadferadwy OA mewn cysylltiad â llid [6,7Disgwylir i driniaethau â gweithgaredd gwrthlidiol a chondroprotective leddfu poen a chynnal cyfanrwydd matrics mewn cleifion OA.
Felly, mae'n debyg y bydd lleihau llid yn fuddiol wrth reoli OA. Mae astudiaethau diweddar yn awgrymu rolau amddiffynnol i adnoddau llysieuol ar ddatblygiad OA, o ran lliniaru llid chondrocytau a dinistrio cartilag ymhellach, trwy eu gallu i ryngweithio â meinweoedd sy'n gysylltiedig â chymalau, gan arwain at liniaru poen yn y cymalau [8].
GwreiddynSaposhnikovia divaricataDefnyddiwyd Schischkin (Umbelliferae) yn helaeth mewn meddygaeth draddodiadol ar gyfer trin cur pen, poen, llid ac arthritis yng Nghorea a Tsieina [9,10]. Yr effeithiau ffarmacolegol amrywiol oSaposhnikovia divaricata(SD) hefyd yn cynnwys priodweddau gwrthlidiol, analgesig, gwrthdwymynol, a gwrtharthritis [9,11Dangosodd astudiaeth ddiweddar fod gan ddyfyniad cromon SD effeithiau posibl arthritis gwrth-rewmatoid mewn model llygoden o arthritis a achosir gan golagen [10]; fodd bynnag, ychydig o astudiaethau a gynhaliwyd i gefnogi gweithgaredd gwrthlidiol a gwrtharthritisSaposhnikovia divaricatadyfyniad (SDE).
Felly, ymchwiliodd yr astudiaeth bresennol i weithgareddau gwrthlidiol a gwrthosteoarthritis dyfyniad ethanol 70% o SD. Yn gyntaf, gwerthuswyd effaith gwrthlidiol SDE.yn vitromewn celloedd RAW 264.7 a achosir gan LPS. Nesaf, mesurwyd effaith gwrth-osteoarthritis SDE trwy asesu dosbarthiad dwyn pwysau, diraddio cartilag ar y cyd, ac ymatebion llidiol mewn model llygoden fawr o OA a achosir gan monosodiwm ïodoasetad (MIA-).